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    • 技術(shù)文章ARTICLE

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      PCR技術(shù)

      發(fā)布時(shí)間: 2025-05-12  點(diǎn)擊次數: 207次

      PCR(聚合酶鏈式反應)技術(shù)由美國生物化學(xué)家凱利·穆利斯于1983年發(fā)明,其核心原理是通過(guò)高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個(gè)步驟的循環(huán),利用DNA聚合酶特異性擴增目標DNA片段。


      早期的PCR擴增受限于耐高溫酶的缺失,效率非常低,因此在科研實(shí)驗領(lǐng)域接受度并不高。

      直至1986年,水生棲熱菌來(lái)源的Taq酶的應用,才實(shí)現PCR穩定、自動(dòng)化的高效擴增。

      PCR實(shí)驗技術(shù)一直以來(lái)不斷發(fā)展,例如基于普通PCR技術(shù)通過(guò)優(yōu)化反應流程而衍生的巢式PCR、基于熱啟動(dòng)酶提高擴增特異性的Hot start PCR、基于熒光檢測技術(shù)而發(fā)展qPCR、基于芯片微孔擴增實(shí)現更高精度分析的數字PCR等。
      一般,正常的PCR反應過(guò)程會(huì )經(jīng)歷3個(gè)核心階段:
      1 高溫95℃解開(kāi)DNA模板(熱變性)
      2 降溫45-60℃使特異性引物與單鏈DNA互補結合(退火)
      3 再次升溫至72℃,耐熱Taq DNA聚合酶沿模板從引物3'端開(kāi)始合成互補鏈(延伸)
      圖片



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