細胞轉染全過(guò)程及ZETA LIFE解決方案

1. 脂質(zhì)體轉染法操作（以 6 孔板為例）

稀釋核酸和脂質(zhì)體：分別取適量核酸和脂質(zhì)體轉染試劑，用 Opti - MEM 培養基稀釋。一般而言，DNA 用量在 0.5 - 2μg，脂質(zhì)體用量在 1 - 4μL，具體比例依試劑說(shuō)明書(shū)和預實(shí)驗優(yōu)化。例如，某實(shí)驗中，將 4μg 質(zhì)粒用 200μl Opti - MEM 稀釋為 A 液，10μl lipo2000 用 200μl Opti - MEM 稀釋為 B 液。

混合孵育：將稀釋后的核酸和脂質(zhì)體輕輕混合，室溫孵育 15 - 20 分鐘，促使核酸和脂質(zhì)體形成復合物。如上述例子，將 B 液加入 A 液中，輕輕混勻，室溫靜置 20 分鐘。

更換培養基：吸除培養細胞的原培養基，用無(wú)血清培養基或 Opti - MEM 培養基輕柔洗滌細胞 1 - 2 次，然后添加適量無(wú)血清培養基。

加入轉染復合物：將孵育好的核酸 - 脂質(zhì)體復合物緩慢加入培養孔，輕輕晃動(dòng)培養板，使復合物均勻分布于細胞表面。

培養：將細胞置于 37℃、5% CO?培養箱繼續培養，4 - 6 小時(shí)后更換為（血清）細胞培養基，維持細胞正常生長(cháng)。

2. 電穿孔轉染法操作

細胞準備：收集對數生長(cháng)期細胞，用 PBS 洗滌后，使用電轉緩沖液重懸細胞，調整細胞密度至合適范圍。

電轉參數設置：根據細胞類(lèi)型和轉染核酸類(lèi)型，設置適宜的電脈沖參數，如電場(chǎng)強度、脈沖時(shí)間、脈沖次數等。例如，某些細胞可能需要 1000V/cm 電場(chǎng)強度，20ms 脈沖時(shí)間，1 次脈沖。

轉染操作：將核酸與細胞懸液混合，轉移至電轉杯中，進(jìn)行電穿孔操作。電脈沖在細胞膜上形成電勢差，誘導產(chǎn)生暫時(shí)的小孔，使核酸進(jìn)入細胞。

細胞恢復：電轉后，將細胞迅速轉移至含（血清）細胞培養基的培養器皿中，置于 37℃、5% CO?培養箱培養，使細胞恢復生長(cháng)。

2. 檢測轉染效率

報告基因檢測：若使用帶有報告基因（如綠色熒光蛋白 GFP）的質(zhì)粒進(jìn)行轉染，可在轉染后 24 - 48 小時(shí)，通過(guò)熒光顯微鏡觀(guān)察報告基因表達情況，統計熒光陽(yáng)性細胞比例，評估轉染效率。

分子生物學(xué)檢測：采用 qPCR、Western blot 等技術(shù)，檢測目的基因 mRNA 或蛋白表達水平變化，判斷轉染后基因的表達情況。例如，通過(guò) qPCR 檢測轉染前后目的基因 mRNA 表達量，計算相對表達倍數。


ZETA LIFE 解決方案

ZETA LIFE 產(chǎn)品優(yōu)勢

Zeta Life 公司專(zhuān)注于細胞培養產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)，其轉染試劑等產(chǎn)品具備顯著(zhù)優(yōu)勢。產(chǎn)品在安全性上表現優(yōu)秀，生產(chǎn)過(guò)程遵循嚴格標準，最大限度降低對細胞的毒性。生產(chǎn)流程自動(dòng)化且經(jīng)過(guò)驗證，符合 GMP 標準，保障了產(chǎn)品一致性，不同批次間產(chǎn)品質(zhì)量穩定可靠。在性能方面，針對多種難轉染細胞系，如 RAW264.7 細胞，能有效提高轉染效率。

• RAW264.7 細胞轉染方案

• 質(zhì)粒 DNA 準備：確保質(zhì)粒 DNA 濃度為 700ng/ul，溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水，且無(wú)內毒素?？墒褂?QIAGEN 試劑盒去除內毒素。

• 細胞接種與轉染時(shí)機：先將細胞接種到細胞培養板，待細胞匯合度達 70% 左右時(shí)進(jìn)行轉染。

• 復合物制備：將質(zhì)粒 DNA 與 Zeta Life 公司 Advanced DNA RNA 轉染試劑（貨號 AD600150）按照 1:1（如 12ug:12ul）比例直接混合，用移液器吹吸 10 - 15 次混勻，室溫靜止 10 - 15 分鐘。

• 轉染操作：將復合物加入含（血清）細胞培養基的細胞培養板，輕輕混勻，放入培養箱繼續培養。不建議將復合物加入無(wú)血清培養基。

• 后續培養與檢測：轉染 24 小時(shí)后對細胞正常換液，質(zhì)粒 DNA 轉染 48 小時(shí)后通過(guò)熒光檢測轉染效率。

• 其他細胞系轉染參考：對于不同細胞系，Zeta Life 產(chǎn)品可依據細胞特性，在核酸與轉染試劑比例、細胞接種密度、轉染時(shí)間等方面進(jìn)行優(yōu)化調整。例如，對于某些生長(cháng)緩慢的原代細胞，可適當降低細胞接種密度，延長(cháng)轉染時(shí)間，同時(shí)調整核酸與轉染試劑比例，以達到最佳轉染效果。在進(jìn)行正式實(shí)驗前，建議開(kāi)展預實(shí)驗，摸索適合特定細胞系的轉染條件。