如何合理設計細胞加藥濃度？

1.概述
藥物，或一切化學(xué)品對細胞的生理狀態(tài)是否能造成影響，能造成多大的影響，是生物學(xué)的基礎實(shí)驗之一。CCK-8與MTT等藥物毒性實(shí)驗就是一種測量方法。我們都知道“脫離劑量談毒性都是耍潑皮"，那么如何設置實(shí)驗中藥物的濃度呢？通常有兩種情形：

直接取一個(gè)固定的濃度，如40μM；

設置一組濃度梯度，如10μM、30μM、100μM。

這二者有什么不同？如何針對自己的實(shí)驗需求來(lái)選擇呢？我們將在下文介紹。

2 固定濃度的情形

一般來(lái)說(shuō)，如果文獻直接甩出一個(gè)固定濃度進(jìn)行實(shí)驗，沒(méi)有進(jìn)行量效測試，說(shuō)明這個(gè)藥物的效應是已知的，就像數學(xué)答案里的“易得"。

這個(gè)時(shí)候就應該查找這段method中是否給出了引用文獻。效應濃度已經(jīng)在更早期的實(shí)驗中確定了，該文章作者本人研究所用的細胞樣本應該和早期文獻也能保持一致，所以他是在復現實(shí)驗，直接照做就可以了。

如果我們是在自己取值做實(shí)驗，通常這個(gè)濃度可能可以從以下角度推導得到：

基于藥物的藥理學(xué)研究，如藥代動(dòng)力學(xué)參數：如果這是一個(gè)已知的藥物分子，我們不是第一次合成得到它，第一次提出以它作為藥物的文獻應該會(huì )提供其藥理學(xué)數據，如半衰期、分布容積等參數，可以基于研究實(shí)驗的目的計算決定；

基于臨床用藥的習慣劑量：如果這個(gè)藥物已經(jīng)用于臨床了，可以參考臨床報告的劑量；

直接抄以前的文獻，拿來(lái)吧你：這就是第一段所說(shuō)的情況，已經(jīng)有人做實(shí)驗得到結論了，那我們可以直接使用同種細胞進(jìn)行進(jìn)一步的研究，反而保證了結論的可重復性。

3 濃度梯度的情形

如果一個(gè)文獻做了多個(gè)濃度或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)來(lái)測試藥物效果，那最大的可能是該文獻所研究的細胞或藥物此前沒(méi)人做過(guò)，作者沒(méi)得引用，所以只能先做量效測評。

所以此時(shí)設計上就要考慮做梯度濃度+不同時(shí)間段的設計，從一系列實(shí)驗結果中找到濃度。

如何設計梯度和組別呢？如果有人做過(guò)類(lèi)似的藥物或類(lèi)似的細胞，我們可以引用前人的智慧，照搬之下再根據實(shí)驗目標作一定校正；如果沒(méi)參考對象，我們可以從以下角度：

設置濃度梯度，搞清楚IC50：先進(jìn)行濃度梯度測試，用5-8個(gè)梯度去做預實(shí)驗，比如每個(gè)梯度差別一倍（10、20、40、80、160μM），總之要覆蓋藥物從低毒性到高毒性（甚至毒性過(guò)強導致細胞死亡）的濃度范圍，據此分組測細胞毒性和增殖，摸清楚這個(gè)藥物的IC50；（IC50計算可使用豆包或deepseek解決）

探索藥物有效劑量的范圍，發(fā)現劑量-效應之間的規律：基于IC50縮減劑量覆蓋的范圍，設置更細化的分組，嘗試畫(huà)出藥效隨劑量增加而上升達到峰值、然后隨劑量過(guò)量導致細胞死亡的曲線(xiàn)。

原則即：找出藥物產(chǎn)生效應的最佳濃度（閾值）以及不同濃度對細胞的影響趨勢。

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