實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的結果分析--實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 常用名詞

校正染料 (ROX)

校正加樣誤差或孔與孔之間的誤差，提供一個(gè)穩定的基線(xiàn)，極大地改進(jìn)定量的精確 度，提高重復管之間的數據重現性。

注意：不同的儀器對 ROX 的需求不同。

基線(xiàn)

PCR 的最初幾個(gè)循環(huán)，在 此基線(xiàn)上熒光信號幾乎沒(méi)有變化。

閾值

可以相信的最小熒光值。

CT 值

擴增曲線(xiàn)與閾值交點(diǎn)的橫坐標。

二、結果有效性判斷

融解曲線(xiàn)單峰 ( 染料法 )

擴增曲線(xiàn)指數擴增區域，復孔間 CT 值 STD<0.2

閾值設置合理

閾值位于指數增長(cháng)期：儀器會(huì )自動(dòng)計算閾值，但并非所有情況下儀器計算結果都是 合理的，必要時(shí)進(jìn)行手動(dòng)調整。

NTC 確認無(wú)氣溶膠污染或可以忽略

NTC = No Template Control (qPCR 反應，模板以水代替 )；

若 ΔCT=NTC (CT 值 ) - 目的基因 (CT 值 ) ≥3 或 ≥5，可認為體系中氣溶膠污染不會(huì ) 影響到實(shí)驗結果的準確性。

NRT 確認無(wú)基因組殘留或可以忽略

NRT=No RT Control ( 逆轉錄反應中，除逆轉錄酶組分，其余組分正常添加 )；

若 ΔCT=NRT (CT 值 ) - 目的基因 (CT 值 ) ≥3 或 ≥5，可認為體系中基因組殘留不會(huì ) 影響到實(shí)驗結果的準確性。

待測 CT 值于線(xiàn)性范圍內

擴增效率符合近似計算標準

PCR 擴增效率 (e) 介于 90%-120% 之間

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