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大鼠星型膠質(zhì)細胞培養實(shí)驗——胰酶消化法

發(fā)布時(shí)間： 2021-12-05　　點(diǎn)擊次數： 1482次

材料與儀器
SD大鼠
苯巴（匕匕）妥解剖液胰蛋白酶 Dnase DM培養液
離心管培養箱手術(shù)器材
步驟
一、取14.5d SD大鼠一只。

二、苯巴（匕匕）妥0.5 ml 腹腔注射，待麻醉后置于手術(shù)臺上，酒精棉球消毒皮膚，開(kāi)腹取出子宮（約12-14個(gè)），放入解剖液中，剖開(kāi)子宮，取出胚胎，放入解剖液中，在耳眼之間離斷，取頭側部組織，去除腦膜組織，取原始中腦區組織，放入離心管裝的解剖液中，待全部取出后，1500轉2分鐘。

三、用吸管吸出上清液，在組織細胞沉淀中加入胰蛋白酶一管（1 ml/vial），室溫30分鐘，1500轉，離心5分鐘（離心前可加入解剖液以終止胰酶作用）。

四、吸去上清，在組織細胞沉淀中加入Dnase 一管（2 ml/vial），37℃反應10分鐘，1500轉，離心5分鐘，吸去上清，在組織細胞沉淀中加入2 ml DM培養液吹打，計數（計數公式為（N1+N2+N3+N4）/4x104），以3x105個(gè)/瓶在培養瓶中培養，做好標記（時(shí)間、原代的還是第幾代傳代，姓名，細胞名稱(chēng)等），放入培養箱中培養。

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