高效率轉染N2a小鼠神經(jīng)瘤母細胞的操作方法

轉染條件：

培養板：6孔板

轉染質(zhì)粒DNA大?。?6000bp

轉染試劑用量：10ul

核酸用量：電訊

轉染時(shí)間：48小時(shí)

轉染試劑：Advanced DNA RNA轉染試劑（AD600150)

培養基：Z7181-500 胎牛血清

細胞凍存：CE70100T無(wú)血清細胞凍存液

操作步驟:

提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉染。

核酸復合物制備：將核酸與轉染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細胞培養基中加入核酸復合物：根據參考用量在細胞中加入核酸復合物，并輕輕混勻；細胞培養基 里面可以含有血清。

細胞換液：轉染 24 小時(shí)后對細胞進(jìn)行正常換液，懸浮細胞轉染過(guò)程中不用換液。

分析結果：質(zhì)粒 DNA 轉染 48-72 小時(shí)后熒光檢測轉染效率，48-96 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達。若進(jìn)行穩定表達細胞株的篩選，則在轉染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉染后 9 小時(shí)熒光檢測轉染效率，48-72 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達。