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補體介導法細胞毒實(shí)驗

發(fā)布時(shí)間： 2021-11-01　　點(diǎn)擊次數： 1586次

材料與儀器
C57BL／6J小鼠
Hank’s液單克隆抗體補體伊紅-Y染液
眼科剪眼科鑷平皿不銹鋼網(wǎng) 試管吸量管尖吸管載玻片蓋玻片顯微鏡
實(shí)驗步驟

一、實(shí)驗方法

1. 小鼠胸腺細胞懸液的制備：將4～6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死，取出胸腺放入已加入約4 ml冷Hank’s液的平皿中，在100目的不銹鋼網(wǎng)上研磨后，過(guò)篩，放入試管，離心1 000 rpm，5分鐘，用Hank’s液洗兩次。將沉淀的細胞重懸于Hank’s液中，配成1×107/ml細胞懸液。

2. 取試管3支，標明順序，依據下表依次加入1×107/ml胸腺細胞懸液、抗小鼠Thy-1的單克隆抗體(最適稀釋度)及Hank’s液，放入37℃水浴30分鐘。

3. 取出后每管加入1%伊紅-Y染液1滴，混勻，室溫放置2分鐘。

4. 重新混勻后分別在一張載玻片上滴片，加蓋玻片鏡檢。先在低倍鏡下觀(guān)察，再用高倍鏡觀(guān)察，比較3管中細胞死活情況。

二、實(shí)驗結果

死細胞呈紅色，無(wú)光澤且腫脹變大；活細胞不著(zhù)色、有光澤且形態(tài)正常。

高倍鏡下計數200個(gè)細胞并計算其中死細胞的百分數。計算公式如下：死細胞百分數= EQ EQ \F(實(shí)驗管死細胞數%-對照管死細胞數%，100%-對照管死細胞數%)

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